Description:

Prezenta invenţie se referă la un procedeu de obţinere a markerului enzimatic acid 3,6-dicloro-2-metoxi-benzoil-glicil fosfatază alcalină, utilizat în tehnica ELISA de analiză a pesticidului, prin dizolvarea a 20 mg acid 3,6-dicloro-2-metoxi-benzoic, 10 mg N-hidroxisuccinimidă şi 50 mg 1-etil-3-(3'-dimetilaminopropil)-carbodiimidă în 1 ml de dimetilformamidă la temperatura camerei, şi agitarea amestecului timp de 4 h, urmată de adăugarea la 10 mg glicină în 2 ml tampon carbonat de sodiu 50 mM, pH 9,6, şi agitarea amestecului 24 h la 5...10°C, apoi centrifugarea la 3000 xg, pentru separarea dicamba-glicinei precipitate, care se spală cu apă rece şi se usucă, după care 5 mg din derivatul dicamba-glicină, 10 mg de N-hidroxisuccinimidă şi 40 mg de 1-etil-3-(3'-dimetilaminopropil)-carbodiimidă în 1 ml de dimetilformamidă se agită timp de 4 h, în vederea activării grupării carboxil a derivatului, la 1 ml de soluţie (5 mg/ml) de fosfatază alcalină în tampon carbonat 50 mM, pH 9,6, se adaugă 100 μ l de pesticid activ, cu agitare continuă timp de 24 h la 4°C, produsul dicamba-glicil-fosfatazăalcalină fiind purificat prin cromatografie pe coloană Sephadex G25, eluată cu tampon fosfat 10 mM, pH 7,5, markerul purificat rezultat fiind depozitat la -25°C.